高壓滅菌器的原理是：在密閉的滅菌器內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。 

注意:完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.1MPa時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘。 
到達(dá)保壓時(shí)間后，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應(yīng)注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當(dāng)壓力降到零后，才能開(kāi)蓋，取出培養(yǎng)基，擺在平臺(tái)上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養(yǎng)基成分變化，以至培養(yǎng)基無(wú)法擺斜面 。一旦放置過(guò)久，由于鍋爐內(nèi)有負(fù)壓，蓋子打不開(kāi)，只要將放氣閥打開(kāi)，大氣壓入，內(nèi)外壓力平衡，蓋子便易打開(kāi)了。 
對(duì)高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(zhǎng)滅菌時(shí)間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓